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猪伪狂犬病三基因缺失活疫苗SA215株(扑伪优)科研成果及高技术产业化

发布日期:2015-06-15信息来源: 四川畜科点击: 我要评论()

 四川华神兽用生物制品有限公司 为四川畜科公司的全资子公司,是专门从事兽用生物制品的研发、生产、销售与技术服务的国家高新技术企业,承担了十多项国家与省科研项目,拥有13项发明专利及实用新型专利。公司以“发展生物高科技,服务现代畜牧业”为企业发展理念,着眼于完整畜牧产业链,打造集产学研、科工贸为一体的高技术创新畜科生物产业园区,批准成立了四川省生物工程技术研究中心,实现人才、技术、产品的聚集和辐射高地。      

公司以四川省畜牧科学院、四川农业大学、中国军事医学科学院等为强大技术依托,于2012年迁至成都西南航空港经济开发区,占地80亩,一期投资2.5亿,建有3个生产车间5条生产线,具有生产胚毒活疫苗、细胞毒活疫苗、猪瘟活疫苗(兔源)的能力。其中,与四川农业大学动物生物技术中心共同研究开发的猪伪狂犬病三基因缺失活疫苗SA215株(扑伪优)为我国第一株具有完全自主知识产权的动物病毒基因工程疫苗,达到国际领先水平。投产初期年产值达3.5亿元。

公司战略合作伙伴--四川农业大学成立于1906年,于1996年进入国家“211” 重点工程学校。学校设22个学院、12个研究所和多个研究中心、84个本科专业、91个硕士授位专业、63个博士授位专业、7个一级学科博士后流动站、4个国家级重点学科、19个部省重点学科,获得500多项重大科研成果,70%科研成果转化推广。

四川农业大学动物生物技术中心为猪伪狂犬病活疫苗SA215株(扑伪优)的主研机构,成果主持人郭万柱教授是首批学术和技术带头人,享受国务院特殊津贴高级专家。猪伪狂犬病三基因缺失活疫苗(SA215株)获国家二类新兽药证书和国家科技进步二等奖。

生物技术中心先后承担了国家自然科学基金项目《伪狂犬病重组疫苗的研究》、《伪狂犬病基因缺失株的构建》和国家“九五”科技攻关项目《伪狂犬病基因缺失疫苗》,并列入国家“863”高科技研发项目,现在正在实施国家发改委“绿色农用生物产品高技术产业化专项”。以我国具有代表意义的毒株——PRV Fa株为起始材料,首次在国内通过酶切、同源重组等基因工程操作方法,构建了伪狂犬病病毒三基因缺失株SA215gE- gI-TK-)。

以上研究成果通过了以殷震院士为主任的专家委员会验收鉴定,结论认为该项研究系列成果丰富了我国动物病毒基因工程研究的理论基础,开创了我国动物病毒基因工程疫苗实用化的先例,促进了我国动物基因工程疫苗的研究和应用,对于我国伪狂犬病的预防控制措施的实施,实现消灭伪狂犬病,将起到决定性的作用。

一、三基因缺失株、中国首创、全球领先。

    本疫苗毒株是以我国猪伪狂犬病病毒流行代表毒株 Fa株为起始材料,首次在国内通过酶切、同源重组等基因操作方法,去掉其主要毒力基因和具有潜伏感染性的基因gE gITK,构建了独特的三基因缺失株,为人工定向基因工程缺失疫苗。相比于自然突变弱毒株具有更优秀的免疫原性、更好的安全性、更独特的抗潜伏感染能力、更适合中国国情的优势,达到全球领先水平。

二、优质佐剂助力系统性免疫增强。

   本疫苗采用优质复合型免疫增强剂为佐剂,调节免疫机能,激活机体系统性免疫,诱导更高水平的细胞免疫和体液免疫,有效对抗免疫抑制,特异性地使毒株免疫保护作用如虎添翼。

三、抗潜伏感染,净化猪伪狂犬病的尖端生物武器

本疫苗毒株“占位”于野毒侵入重要上行通道,有效阻止野毒“入侵”中枢神经系统,这一优异的抗潜伏感染功效可解决猪群伪狂犬病的“长治久安”。(实验猪只各器官检出野毒的情况,见下表1

 

SA215接种组

Bartha接种组

野毒攻毒组

鼻粘

0/4

0/4

1/4

咽粘膜

1/4

1/4

3/4

嗅上皮

2/4

1/4

3/4

扁桃体

4/4

4/4

4/4

软鄂

2/4

2/4

3/4

腮腺下淋巴结

1/4

2/4

3/4

三叉神经节

4/4

4/4

4/4

嗅球

2/4

3/4

4/4

 

1/4

2/4

4/4

 

0/4

1/4

3/4

 

0/4

1/4

3/4

 

0/4

1/4

4/4

 

0/4

0/4

3/4

 

0/4

0/4

1/4

 

0/4

0/4

1/4

 

17/60

22/60

44/60

 

四、显著提高母猪繁殖力和仔猪存活率,并缩短出栏日数。

对有伪狂犬病史或野毒阳性率高的猪场,扑伪优接种母猪后,其母猪窝平均产健康仔数比非免疫组高2.98,窝平均断奶存活仔数比非免疫组高5.10头(见下表)。

 

试验

猪数

是否

PR

免疫前抗

体阳性率

弱仔

死胎

木乃

伊胎

健活

仔数

窝平均

活仔数

窝平均断奶存活仔数

A

89

免疫

46.5%

4

8

0

967

10.86

9.86

B

90

免疫

40.3%

13

7

0

969

10.72

9.80

C

75

免疫

76.5%

12

9

0

848

11.31

10.16

D

65

免疫

80.9%

18

10

0

690

10.62

9.81

E

108

免疫

32.2%

20

11

0

1191

11.03

9.90

对照

73

未免

55.7%

67

160

23

579

7.93

4.81

猪伪狂犬病病毒是造成猪只呼吸道综合征PRDC优势病原之一,病毒感染导致育肥猪只生长受阻,使用扑伪优可同比增重21.1%,肥猪可提前出栏9-13天。

猪场

免疫商品猪数

免疫前PRV阳性率(%)

免疫前均重(kg

出栏均重(kg

A

779

30.77%

19.7

119.8

B

822

27.45%

19.5

122.8

C

756

30.18%

19.0

121.9

D

749

23.49%

18.9

125.6

对照

1504

31.05%

18.1

101.2

 

五、免疫保护建立快,抗体水平高而持久,免疫效果好,保护力强

1.      21日龄猪只免疫SA215疫苗后,最早于第1周产生中和抗体,平均效价1:12;第8周中和抗体平均效价达1:82,高于同期Bartha疫苗组中和抗体水平(平均效价为1:70);SA215疫苗组至第24周仍维持理想抗体水平,平均效价为1:31。(见下图)。

2.      21日龄猪只分别免疫SA215疫苗和Bartha疫苗后两周,对其进行伪狂犬强毒106PFU剂量的攻毒(相当于现实生产猪只遭遇伪狂犬野毒感染剂量的10-5倍),SA215疫苗免疫组猪只对外环境散毒的量明显低于Bartha疫苗免疫组猪只,散毒时间至少短3天。(见下图)

3.      21日龄猪只分别免疫SA215疫苗和Bartha疫苗后分别于第124681224周,对其进行伪狂犬强毒5×107PFU剂量的攻毒(相当于现实生产猪只遭遇伪狂犬野毒感染剂量的500-250倍),SA215疫苗对免疫组猪只表现出了良好的保护率(保护率:健康无发病症状猪只在实验猪群中所占比例,见下图)。

 

4.      母猪接种后48-60h可产生抗体,7天可检测抗体达1:70以上, 4周后可达1:512. 在所测定的6个月内一直维持较高水平。(见下图)

5.      母猪接种扑伪优后,其所产仔猪具有高水平母源抗体,母源抗体之保护可达7周龄以上。(见下图)

猪伪狂犬病三基因缺失活疫苗SA215株(扑伪优)科研成果及高技术产业化

 

六、鉴别诊断国际接轨

SA215疫苗gE基因缺失便于使用国际国内市售主流检测试剂盒对疫苗接种和野毒感染猪只做鉴别诊断,为猪场疫病监控及伪狂犬净化提供科学决策。

七、使用方法

跟胎免疫:母猪可在配种前3-4周接种一次,此后在每胎产前3-4周接种一次。

定期普免:全场猪只每年免疫3次,每4个月一次。

免疫方法:每头剂扑伪优使用2毫升专用稀释液稀释后,肌内注射。

疫苗保存:在冷藏条件下(2℃~8℃),疫苗可保存12个月(一年)。

          在冷冻条件下(-10℃~-15℃),疫苗可保存18个月(一年半)。

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